Przeprowadzamy również eksperymenty PCR, dlaczego wyniki są zawsze o wiele gorsze od innych?

Przeprowadzamy również eksperymenty PCR, dlaczego wyniki są zawsze o wiele gorsze od innych?

W laboratorium spójrz na PCR innych ludzi, wydajność amplifikacji jest wysoka, pasek do elektroforezy doskonały i spójrz na własne, trudne do zrobienia przez długi czas, poczuj, że reakcja jest bardzo dobra, wynik testu fałszywie dodatniego…… Co to jest problem?

Uważam, że wielu naszych partnerów również napotkało różne problemy. Kiedy w eksperymentach PCR natkniemy się na ścianę, podświadomie przeanalizujemy czynniki w układzie reakcyjnym, ale często ignorujemy ważny wpływ materiałów eksploatacyjnych w eksperymentach.

Twój wynik PCR jest nieprawidłowy, podstawowym powodem mogą być materiały eksploatacyjne do PCR. Z jednej strony mikroskażenie materiałów eksploatacyjnych lub wprowadzenie inhibitorów spowoduje zanieczyszczenie eksperymentalne; Z drugiej strony, nieodpowiedni dobór materiałów eksploatacyjnych również ucierpi na wynikach eksperymentów.

Problem pojawia się ponownie. Istnieje wiele rodzajów materiałów eksploatacyjnych do PCR, jak więc wybrać te właściwe, aby eksperyment był płynniejszy? Na jakie problemy należy zwrócić uwagę? Nie martw się, dzisiajI w połączeniu z wieloletnim doświadczeniem, rozwiązywaniem typowych problemów doboru materiałów eksploatacyjnych do PCR, mam nadzieję, że pomogę.

 

P1: Dlaczego materiały eksploatacyjne do PCR są zwykle wykonane z materiału PP?

Huida: Ponieważ materiały do ​​PCR są zwykle w bezpośrednim kontakcie z odczynnikami lub próbkami, materiały polipropylenowe (PP) są biologicznie obojętne, nie przylegają do biomolekularnych i mają dobrą tolerancję chemiczną i temperaturę (mogą być autoklapsowane przy 121 ° C, może również wytrzymać zmiany temperatury podczas cyklu termicznego).

 

P2: Jak powinienem wybierać pomiędzy różnymi rozmiarami probówek/płytek do PCR?

HUIDA: Cel selekcji: wybierz właściwe produkty zgodnie z określonymi wymaganiami eksperymentalnymi. Większość rozmiarów probówki do PCR może spełniać wymagania reakcji PCR. Na tej podstawie zaleca się najpierw wybrać rurkę o małej objętości. Ponieważ rura/płytka reakcyjna o małej objętości ma małą przestrzeń nad głową, poprawia się przewodność cieplna i zmniejsza się parowanie. Jednocześnie należy unikać dodawania zbyt dużej lub zbyt małej ilości próbek. Zbyt duża ilość może prowadzić do zmniejszenia przewodności cieplnej, rozlania i zanieczyszczenia krzyżowego, natomiast zbyt mała może skutkować utratą próbki przez parowanie.

Specyfikacje i objętości typowych probówek reakcyjnych:

Probówka pojedyncza/połączona: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

96-dołkowa płytka: 0,2 ml, 0,15 ml

Płytka 384-dołkowa: 0,04 ml

 

P3: Gdy ilość próbki jest niewielka, wybiorę rurę pojedynczą lub rurę kombinowaną, ale dlaczego niektóre mają płaską osłonę, a niektóre mają wypukłą osłonę?

Huida: Gdy ilość próbki jest mała, preferowana będzie pojedyncza rurka lub połączona rurka. Jednak gdy objętość reakcji jest duża, dominuje pojedyncza probówka, a objętość może osiągnąć 0,5 ml. Płaska pokrywa i wypukła pokrywa mają tę zaletę, konkretne mogą odnosić się do następujących informacji.

Pojedyncza probówka: 0,2 ml i 0,5 ml; Potrafi elastycznie wybierać ilość próbki.

Rurka łącząca: 0,2 ml lub 0,15 ml jest opcjonalne; 8 lub 12 probówek jest powszechnych.

Pokrywa płaska: zapewnia dokładną transmisję sygnału fluorescencyjnego dla qPCR; Łatwe do pisania znaków.

Wypukła pokrywa: kontakt z gorącą pokrywą instrumentu PCR w celu zmniejszenia deformacji probówki reakcyjnej spowodowanej ciśnieniem; Jednak wpłynie to na transmisję sygnału fluorescencyjnego i nie może być zastosowane w eksperymencie qPCR.

 

P4: Dlaczego niektóre płytki do PCR mają spódnice, a inne nie?

Huida: W rzeczywistości osłona płytki PCR została zaprojektowana tak, aby lepiej dostosować się do zastosowań automatyzacji, zapewniając stabilne podparcie i wytrzymałość mechaniczną urządzenia, a także wyższą stabilność podczas procesu pipetowania.

Płytki do PCR są generalnie podzielone na bez hemliny, połówkową hemlinę i pełną hemlinę.

Bez Płytka: Nadaje się do większości maszyn PCR lub maszyn qPCR, ale nie do zastosowań automatyzacyjnych. Stabilność w procesie pipetowania nie jest wysoka, dlatego należy go używać z podparciem płytki.

Płytka krawędziowa do połowy fartucha: może być dostosowana do aplikacji etykiet lub kodów kreskowych oraz aplikacji automatycznej i ma dobrą stabilność podczas pipetowania.

Pełna płyta krawędziowa: bardzo odpowiednia do zautomatyzowanych zastosowań eksperymentalnych, może być również dostosowana do etykiety i nanoszenia kodu kreskowego. Charakteryzuje się dobrą wytrzymałością mechaniczną, może być stosowany w przyrządach PCR z modułem wypukłym i charakteryzuje się wysoką stabilnością w procesie pipetowania.

 

Q5 :Dlaczego w przypadku płytek do PCR rogi i etykiety nie są dokładnie takie same?

Huida: To zależy od efektu cięcia narożników i znakowania.

Cięcie narożne: Wybór pozycji cięcia narożnego płytki PCR zależy od wymagań odpowiedniego instrumentu dla łatwego pozycjonowania.

Identyfikacja: Markery alfanumeryczne na płytkach do PCR pomagają zidentyfikować poszczególne dołki i lokalizacje próbek. Generalnie dla wytłoczonego kolorowego logo cyfrowego lub grawerowanego logo. W przypadku niektórych zautomatyzowanych zastosowań drukowane i oznaczone płytki reakcyjne są lepiej uszczelniane.

 

P6: Dlaczego niektóre płytki PCR są wypukłe, a inne płaskie? Co jest lepsze?

Huida: To, co pasuje, jest najlepsze. Istnieją dwa rodzaje popularnych płytek do PCR: płaski margines porów i wysoki margines porów.

Płytka reakcyjna z płaskim otworem, odpowiednia do większości aparatów PCR

Płytki reakcyjne ze wznoszącymi się krawędziami otworów ułatwiają uszczelnienie membrany i zmniejszają ryzyko zanieczyszczenia krzyżowego między próbkami.

 

Huida posiada wieloletnie doświadczenie w produkcji i przetwarzaniu produktów PCR oraz wysokie standardy przemysłowe. Linia produktów jest bogata i może sprostać większości zastosowań eksperymentalnych PCR. Przyjdź i wybierz odpowiednie produkty do swoich eksperymentalnych zastosowań.

谷歌推广疫情产品PCR


Czas publikacji: 03.06.-2021 r